Adacık Benzeri Hücre Kümeleşmesinde Gen Anlatım Değişimleri

Mehveş Poda; Buşra Gizem Hasanoğulları; Fatma Yeliz Ekici; Feyza Nur Tuncer

Article Details

Adacık Benzeri Hücre Kümeleşmesinde Gen Anlatım Değişimleri

Authors:

Mehveş Poda | Buşra Gizem Hasanoğulları | Fatma Yeliz Ekici | Feyza Nur Tuncer

Publisher:

Istanbul University

Journal:

Journal of Experimental Medicine 2017 Vol.7 Issue 13, pp.87-92

Document Type:

Article

Publication Date:

5/2017

Document Language:

Turkish

Document ID (Org No.):

2000429087

eISSN:

2667-5846

Abstract:

 


Objectives: The PANC-1 cell line is a cancer cell line, which is derived from pancreatic ductal human

carcinoma cells, can give a proliferative response to insulin and PDX1, KLF4 ve OCT4 transcription

factors are known to be expressed endogenously. When induced in cell culture, these cells may form

islet cell-like aggregates (ICA), expressing pancreatic hormones. We aimed to characterize the changes

in the expression of SST, GCG, PDX1, KLF4 ve OCT4 genes, with the provision that ICAs having three

dimensional cellular stuructures, may be used as a model system for studying metabolic pathways in

the future.

Materials and Methods: In order to be able to compare the gene expression levels in basal culture

conditions with the ICA forming protocol, RNA was extracted from cell lysates. After cDNA syntesis,

SST, GCG, PDX1, KLF4 ve OCT4 gene expression was determined by using SYBR-Green. PPIA was used

as housekeeping gene and the fold differences were calculated by using 2-DDCt method.

Results: When taking the basal conditions as reference, glucagon (GCG) (p=0.2) expression was

first slightly reduced and stayed stable at 24th and 336th hr timepoints in the induced ICA formations.

In spite of this, somatostatin (SST) (p=0.0014) gene expression was upregulated 2.3 fold at 24th hr.

and 10.82 fold at 336th hr. The expression of PDX1 (P=0.02) and KLF4 (P=0.15) gene expressions were

reduced and stayed stable. OCT4 (P=0.03) gene expression was first reduced whreas it was rising to

2.8 fold.

Conclusion: The upregulation of SST gene expression indicates that the ICA formations contain

rather Langerhans delta cells-like characteristics. Our preliminary data suggested that this experimental

model be utilized for the future research purposes.


.

 


Amaç: PANC-1 hücre hattı ekzokrin pankreastan kaynaklı, insüline proliferatif tepki veren bir

kanser hücre hattıdır ve bu hücrelerde PDX1, KLF4 ve OCT4 transkripsiyon faktörlerinin endojen

olarak gen anlatımının varlığı daha önce de bildirilmiştir. Bu hücreler özel kültür şartları altında

indüklendiklerinde, pankreatik hormon üreten adacık-benzeri hücre kümeleşmeleri (AHK)

oluşturabilirler. Üç boyutlu yapılar olan AHK oluşumlarının, metabolik yolakların da incelenebileceği

bir hücresel model olabileceği öngörüsüyle, SST, GCG, PDX1, KLF4 ve OCT4 gen anlatım

düzeylerindeki değişimlerini karakterize etmeyi amaçladık.

Yöntem: Bazal kültür şartları ile AHK protokolü uygulanmış hücrelerdeki gen anlatım

düzeylerinin karşılaştırılabilmesi amacıyla, hücre lizatlarından total RNA eldesi yapıldı. Daha sonra

cDNA elde edilerek SYBR-Green kullanımıyla SST, GCG, PDX1, KLF4 ve OCT4 gen anlatım düzeyleri

gerçek zamanlı PCR metoduyla belirlendi. Gen anlatım farkı, PPIA geni normalizasyon referansı

alınarak DDCt metodu kullanıldı ve istatistik anlamlılıklar düzeyleri two paired ANOVA metodu ile

hesaplandı.

Bulgular: Bazal şartlara göre karşılaştırma yapıldığında, indüklenmiş AHK oluşumlarının 24 ve

336’ıncı saatlerinde, Glukagon (GCG) (p=0.2) ekspresyonunun hafifçe azalarak sabit kaldığı, ancak bu

değişimin anlamlı olmadığı saptandı. Buna karşılık, Somatostatin (SST) (p=0.0014) gen anlatımında

bazale göre, 24’üncü saatte 2.3 kat, 336’ıncı saatte 10.82 kat artış saptandı. PDX1 (P=0.02) ve KLF4

(P=0.15) gen anlatımları bazala göre düşmekte ve sabit kalmaktaydı. OCT4 (P=0.03) gen anlatımı ise

önce düşmesine rağmen daha sonra 2.8 kat yükselmekteydi.

Sonuçlar: AHK oluşumu sonucunda özellikle SST gen anlatımının yükseldiği saptanmış olması oluşan

hücre kümeleşmelerinin ağırlıkla Langerhans delta hücresi benzeri karakterlere sahip olabileceğine

işaret etmektedir. Bu ön bulgular oluşan deneysel modelin faydalı bir model olarak kullanılacağına

işaret etmektedir.


.

Article Details

Adacık Benzeri Hücre Kümeleşmesinde Gen Anlatım Değişimleri

Authors: Mehveş Poda | Buşra Gizem Hasanoğulları | Fatma Yeliz Ekici | Feyza Nur Tuncer

Publisher: Istanbul University

Journal: Journal of Experimental Medicine 2017 Vol.7 Issue 13, pp.87-92

Document Type: Article

Publication Date: 5/2017

Document Language: Turkish

Document ID (Org No.): 2000429087

eISSN: 2667-5846

Issues

Authors:

Mehveş Poda | Buşra Gizem Hasanoğulları | Fatma Yeliz Ekici | Feyza Nur Tuncer

Publisher:

Istanbul University

Journal:

Journal of Experimental Medicine 2017 Vol.7 Issue 13, pp.87-92

Document Type:

Article

Publication Date:

5/2017

Document Language:

Turkish

Document ID (Org No.):

2000429087

eISSN:

2667-5846