Siyan (mavi) Fluoresan Protein Aquamarine’nin Biyoreaktörde Üretilmesi ve Saflaştırılması

Hülya KUDUĞ CEYLAN; Rizvan İMAMOĞLU; İsa GÖKÇE

Article Details

Siyan (mavi) Fluoresan Protein Aquamarine’nin Biyoreaktörde Üretilmesi ve Saflaştırılması

Authors:

Hülya KUDUĞ CEYLAN | Rizvan İMAMOĞLU | İsa GÖKÇE

Publisher:

Osman SAĞDIÇ

Main Topics:

Applied physics

Journal:

European Journal of Science and Technology 2020 Vol. Issue 18, pp.300-305

Document Type:

Article

Publication Date:

4/2020

Document Language:

Turkish

Document ID (Org No.):

2000919244

Frequency:

Quarterly

eISSN:

2148-2683

Keywords:

Abstract:

 

Aquamarine is a member of the cyan fluorescent protein (CFP) protein family and is a GFP (green fluorescent protein) derived fluorescent protein from Aequorea victoria. Aquamarine-like fluorescence proteins are often used for biological imaging and localization studies of living cells due to their properties developed by genetic engineering techniques. In this study, Escherichia coli BL21 (AI) cells were transformed with pROEX Aqua plasmid DNA and protein expression was induced by the addition of arabinose at a concentration of 0.04%. Histidine-labeled target protein produced at high expression levels in the bioreactor that has 3L culture volume was purified by Ni+2 affinity chromatography. About 80 mg of the purified protein was yielded per liter of bacterial culture. The photoluminescence properties of the Aquamarine were analyzed by fluorimeter. SDS-PAGE analysis shows a single band corresponding to the recombinant Aquamarine that was obtained high yield and purity (>95%) for further studies.

 

Aquamarine proteini siyan (mavi ) floresan protein ailesinin bir üyesi olup ve Aequorea victoria'dan elde edilen GFP (yeşil floresan protein) türevi floresan bir proteindir. Aquamarine benzeri floresan proteinler genetik mühendisliği teknikleri ile geliştirilmiş özellikleri sayesinde canlı hücrelerin biyolojik olarak görüntülenmesi ve hücre içerisinde lokalizasyon çalışmaları için sıklıkla kullanılmaktadır. Bu çalışmada Escherichia coli BL21(AI) hücreleri pROEX Aqua plasmid DNA’sı ile transforme edilmiş ve % 0.04 konsantrasyonda arabinoz ilavesi ile protein ekspresyonu indüklenmiştir. 3L kültür hacimli biyoreaktörde yüksek ekspresyon seviyesinde üretilen Histidin etiketli hedef protein Ni+2 afinite kromotografisi ile saflaştırılmıştır. Saflaştırılan protein konsantrasyonu bir litre bakteri kültürü için 80 mg olarak belirlenmiştir. Rekombinant Aquamarine’ne ait fotolüminesans özellikler florometre ile analiz edilmiştir. SDS-PAGE analizi rekombinant Aquamarine proteine ait tek bir bandın olduğunu ve saflaştırılan proteinin ileri çalışmalarda kullanılmak üzere yüksek verimde ve saflıkta (>%95) elde edildiğini göstermektedir.

Article Details

Siyan (mavi) Fluoresan Protein Aquamarine’nin Biyoreaktörde Üretilmesi ve Saflaştırılması

Authors:

Hülya KUDUĞ CEYLAN | Rizvan İMAMOĞLU | İsa GÖKÇE

Publisher:

Osman SAĞDIÇ

Main Topics:

Applied physics

Journal:

European Journal of Science and Technology 2020 Vol. Issue 18, pp.300-305

Document Type:

Article

Publication Date:

4/2020

Document Language:

Turkish

Document ID (Org No.):

2000919244

Frequency:

Quarterly

eISSN:

2148-2683

Aquamarine

Siyan (mavi) Floresan Proteini

GFP

E. coli

Rekombinant protein

Issues

Article Details

Siyan (mavi) Fluoresan Protein Aquamarine’nin Biyoreaktörde Üretilmesi ve Saflaştırılması

Authors: Hülya KUDUĞ CEYLAN | Rizvan İMAMOĞLU | İsa GÖKÇE

Publisher: Osman SAĞDIÇ

Main Topics: Applied physics

Journal: European Journal of Science and Technology 2020 Vol. Issue 18, pp.300-305

Document Type: Article

Publication Date: 4/2020

Document Language: Turkish

Document ID (Org No.): 2000919244

Frequency: Quarterly

eISSN: 2148-2683

Aquamarine

Siyan (mavi) Floresan Proteini

GFP

E. coli

Rekombinant protein

Issues

Authors:

Hülya KUDUĞ CEYLAN | Rizvan İMAMOĞLU | İsa GÖKÇE

Publisher:

Osman SAĞDIÇ

Main Topics:

Applied physics

Journal:

European Journal of Science and Technology 2020 Vol. Issue 18, pp.300-305

Document Type:

Article

Publication Date:

4/2020

Document Language:

Turkish

Document ID (Org No.):

2000919244

Frequency:

Quarterly

eISSN:

2148-2683