İnsan İnsülin Hormonu Öncülerinin Pichia pastoris AOX1 Promotoru Altında Klonlanması, Ekspresyonu ve Biyoreaktörde Üretimi

Aysun TÜRKANOĞLU ÖZÇELİK; Ayşe TORUN; Semiramis YILMAZ; Mehmet İNAN

Article Details

İnsan İnsülin Hormonu Öncülerinin Pichia pastoris AOX1 Promotoru Altında Klonlanması, Ekspresyonu ve Biyoreaktörde Üretimi

Authors:

Aysun TÜRKANOĞLU ÖZÇELİK | Ayşe TORUN | Semiramis YILMAZ | Mehmet İNAN

Publisher:

Süleyman Demirel University

Journal:

Süleyman Demirel University Journal of Natural and Applied Sciences 2018 Vol.22 Issue 3, pp.1190-1196

Document Type:

Article

Publication Date:

9/2018

Document Language:

Turkish

Document ID (Org No.):

2000553883

Frequency:

Tri-annual

eISSN:

1308-6529

Abstract:

 


Insulin is a peptide hormone, produced by beta cells
of the pancreas, and regulates the glucose homeostasis in the body. Diabetes
mellitus is a metabolic disease in which a person has high blood sugar, either
because the pancreas does not produce enough insulin, or because cells do not
respond to produced insulin. At the present time, insulin is used to treatment
of this disease. Insulin hormone is first protein produced recombinantly by
using genetic engineering techniques. Firstly, it was produced in E. coli and Saccharomyces
cerevisiae, but
recently the number of studies that used Pichia
pastoris (Komagataella phaffi) in the production of recombinant insulin
increase. In this study, in order to produce human insulin hormone precursor
(IP) under the  inducible AOX1 promoter in P. pastoris, an expression vector encoding desired protein was
obtained by transferring DNA fragment coding this protein to the plasmid using
molecular biology techniques such as transformation and ligation. Expression
vector was transferred via electroporation to Pichia pastoris  X33 strain
which rendered by lithium acetate method. After protein expression study in 5L
bioreactor, obtained samples were analyzed with SDS-PAGE and ELISA methods and
determined 7.5 mg/L protein produced. 

.

 


İnsülin
pankreasın beta hücrelerinden üretilen ve vücutta glukoz dengesini sağlayan
önemli bir peptit hormondur. Pankreasın yeterli miktarda insülin üretememesi ya
da hücrelerin üretilen insüline cevap verememesi sonucu kan glukoz düzeyinin
yükselmesiyle diyabet adı verilen metabolik bir hastalık meydana gelir.
Günümüzde bu hastalığın tedavisinde insülin hormonu kullanılmaktadır. İnsülin
hormonu genetik mühendisliği teknikleri kullanılarak rekombinant olarak
üretilen ilk proteindir. İlk olarak Escherichia
coli ve Saccharomyces cerevisiae’da üretilmeye başlanmış, ancak son zamanlarda rekombinant insülin üretiminde Pichia pastoris (Komagataella phaffi) ’in  kullanımı
yaygınlaşmıştır. Bu çalışmada, insan insülin hormonu öncülerinin (IP) P. pastoris’in metanol ile
indüklenebilir AOX1 promotoru altında
üretimini sağlamak amacıyla; bu proteini kodlayan DNA fragmenti transformasyon
ve ligasyon gibi moleküler biyoloji teknikleri kullanılarak plazmide aktarılarak
istenen proteini kodlayan bir ekspresyon vektörü elde edilmiştir. Ekspresyon
vektörünün lityum asetat yöntemiyle yetenekli hale getirilen P. pastoris X33 suşuna elektroporasyonla
transferi sağlanmıştır. 5L ölçekli biyoreaktörde yapılan protein ekspresyonu
çalışması sonrasında alınan örnekler SDS-PAGE ve ELISA yöntemleriyle analiz
edilmiş ve 7.5 mg/L IP proteini üretildiği tespit edilmiştir.

.

Article Details

İnsan İnsülin Hormonu Öncülerinin Pichia pastoris AOX1 Promotoru Altında Klonlanması, Ekspresyonu ve Biyoreaktörde Üretimi

Authors: Aysun TÜRKANOĞLU ÖZÇELİK | Ayşe TORUN | Semiramis YILMAZ | Mehmet İNAN

Publisher: Süleyman Demirel University

Journal: Süleyman Demirel University Journal of Natural and Applied Sciences 2018 Vol.22 Issue 3, pp.1190-1196

Document Type: Article

Publication Date: 9/2018

Document Language: Turkish

Document ID (Org No.): 2000553883

Frequency: Tri-annual

eISSN: 1308-6529

Issues

Authors:

Aysun TÜRKANOĞLU ÖZÇELİK | Ayşe TORUN | Semiramis YILMAZ | Mehmet İNAN

Publisher:

Süleyman Demirel University

Journal:

Süleyman Demirel University Journal of Natural and Applied Sciences 2018 Vol.22 Issue 3, pp.1190-1196

Document Type:

Article

Publication Date:

9/2018

Document Language:

Turkish

Document ID (Org No.):

2000553883

Frequency:

Tri-annual

eISSN:

1308-6529