Expression in Escherichia Coli of a Single - Chain Variable - Fragment ( scFv ) Against the Amino Acid Motif DELLA of Plant Transcription Factor Is Toxic to E. Coli

Taha Al-Samarrai

doi:10.12816/0010080

Article Details

Expression in Escherichia Coli of a Single - Chain Variable - Fragment ( scFv ) Against the Amino Acid Motif DELLA of Plant Transcription Factor Is Toxic to E. Coli

Authors:

Taha Al-Samarrai

Publisher:

The International Centre for Advancement of Sciences and Technology

Main Topics:

Chemistry and allied sciences

Journal:

International Journal for Sciences and Technology 2013 vol.8 Issue 4, pp.19-26

Document Type:

Article

Publication Date:

12/2013

Document Language:

English

Document ID (Org No.):

60330

Frequency:

Quarterly

eISSN:

18172509

pISSN:

18162509

DOI:

10.12816/0010080

Descriptors:

Keywords:

Abstract:

 The aim of the current study was to generate scFv that targeted a DELLA motif of DELLA proteins by immunization with a synthetic peptide- KLH conjugate. Expression level of scFv by E. coli was low due to toxicity. However, the mechanism of toxicity caused by scFv over expression may not indicate a single target. We used P. pastoris system as alternative, but we found that, the purified scFvs, unable to interact with their target (At) RGA recombinant protein. The experimental results suggested that, the cellular toxicity in E.coli was due to binding of scFv with host’s protein. None of the irrelevant 8g8 scFv and an irrelevant MAB anti-CIN 1 protein interacted with hosts proteins, or influenced the viability of the cells. It is desirable to do a protein blast search for presence of the peptide in the expression host in case scFv needed to be obtained from MAB generated from immunization with that synthetic peptide from highly conserved domain of a protein in addition to investigation of the reactivity of MAb to hosts cells.

 تم توليد اس سي اف في (ScFv) التي لها القدره على الاتحاد مع الجزء من الاحماض الامينيه دي ل ل ي (DELLA) لانواع من البروتينات الحاويه عاى الجزء من الاحماض الامينيه دي ل ل ي (DELLA ) وذلك عن طريق التحصين بسستخدام الببتايد المركبه كي ال ام  ( (KLM٠). لقد كان مستوى الانتاج لل اس سي اف في(ScFv) في المضيف منخض جدآ نتيجت الذيفييه لل اس سي اف في (ScFv) للمظيف اشريكييا كولي (E.coli) .ان اليه الذيفيه التي سببتها اس سي اف في (ScFv) قد لا تدل على آليه واحده . وعليه فلقد تم استخدام مظيف اخر هي بيشييا باستورس (Patia pastoris ) كبديل٠ لقد وجدنا ال اس سي اف في (ScFv) المنتجه غير فعاله وليست لها القدره على التفاعل مع البروتينات الحاويه عاى الاحماض الامينيه دي ل ل ي (DELLA ) . ان هذه النتائج تدل من ان الذيفيه لخلايا اشريكييا كولاي (E.coli) بسبب اتحاد ال اس سي اف في(ScFv) مع البروتينات الحاويه عاى دي ل ل ي (DELLA ) للمظيف. لم يحصل هذا الاتحاد باسستخدام انواع اخرى من ال اس سي اف في (ScFv) المحضره ضد بروتينات لا تحوي الاحماض الامينيه دي ل ل ي (DELLA ) ومثال هو الاجسام الظاده من وحيده الخليه ( MAB) والمحظره ضد CIN 1 . ان هذا الاتحاد لم يتم مع بروتينات المضيف. بناء عاى ذلك فمن الافظل اجراء بحث لمعرفه وجود الببتايد في المضيف المنتج لل اس سي اف (ScFv) والتي تكون الحاجه الى الحصول لاضداد نوعيه من التحصين باستخدام ببتايد مركبه مختبريا و هذه الببتايد هي جزء محفوظ من البروتين اضافه الى بحث النشاط للاضداد التي تم االحصول عليها ( MAB).

Article Details

Expression in Escherichia Coli of a Single - Chain Variable - Fragment ( scFv ) Against the Amino Acid Motif DELLA of Plant Transcription Factor Is Toxic to E. Coli

Authors:

Taha Al-Samarrai

Publisher:

The International Centre for Advancement of Sciences and Technology

Main Topics:

Chemistry and allied sciences

Journal:

International Journal for Sciences and Technology 2013 vol.8 Issue 4, pp.19-26

Document Type:

Article

Publication Date:

12/2013

Document Language:

English

Document ID (Org No.):

60330

Frequency:

Quarterly

eISSN:

18172509

pISSN:

18162509

DOI:

10.12816/0010080

Descriptors:

PLANTS

PLANT PROTEINS

CHEMICAL REACTIONS

GENES

ANTIBODIES

DELLA proteins

(At) RGA

synthetic peptide- KLH conjugate

scFv

P. pastoris

Escherichia coli

Venturia inaequalis

Arabidopsis thaliana

Issues

Article Details

Authors: Taha Al-Samarrai

Publisher: The International Centre for Advancement of Sciences and Technology

Main Topics: Chemistry and allied sciences

Journal: International Journal for Sciences and Technology 2013 vol.8 Issue 4, pp.19-26

Document Type: Article

Publication Date: 12/2013

Document Language: English

Document ID (Org No.): 60330

Frequency: Quarterly

eISSN: 18172509

pISSN: 18162509

DOI: 10.12816/0010080

Descriptors:

Issues

Authors:

Taha Al-Samarrai

Publisher:

The International Centre for Advancement of Sciences and Technology

Main Topics:

Chemistry and allied sciences

Journal:

International Journal for Sciences and Technology 2013 vol.8 Issue 4, pp.19-26

Document Type:

Article

Publication Date:

12/2013

Document Language:

English

Document ID (Org No.):

60330

Frequency:

Quarterly

eISSN:

18172509

pISSN:

18162509

DOI:

10.12816/0010080